基于核酸侵入反应偶联PCR的粪便样本基因甲基化定量分析方法及用于结直肠癌无创筛查

• 作者: 刘琳琳 周国华 宋沁馨 邹秉杰 齐谢敏
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: DNA甲基化 实时荧光聚合酶链式反应 核酸侵入反应 结直肠癌 粪便DNA
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1552-1559
• 页数: 8页
• 字数: 4576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.181117

摘要

从粪便中检测BMP3基因甲基化水平可实现对结直肠癌的无创筛查,但对检测方法的灵敏度与特异性要求很高.本研究将核酸侵入反应与实时荧光聚合酶链式反应(PCR)偶联,建立了BMP3基因甲基化检测方法,以ACTB基因作为参比基因,通过优化反应体系中探针浓度、Flap核酸内切酶与Taq酶用量,提高BMP3目标基因与ACTB参比基因的扩增效率至接近100％,实现了利用△CT法进行BMP3基因甲基化水平的相对定量,可对低至10 copies的甲基化BMP3基因进行检测,并可从非甲基化模板中准确定量0.01％的甲基化模板,非甲基化模板不产生非特异性信号,表明本方法具有极高的灵敏度与良好的特异性.将本方法用于16例结直肠癌患者、7例结直肠腺瘤患者及19例健康人粪便样本中BMP3基因甲基化检测,结果表明,有5例结直肠癌患者的粪便样本检出BMP3基因甲基化,2例结直肠腺瘤患者的粪便样本检出BMP3甲基化,健康人的粪便样本均没有检出甲基化,表明本方法可用于检测粪便样本中基因的甲基化水平,为临床开展基于粪便中基因甲基化检测的无创结直肠癌筛查提供了新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周国华	中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室	42	681	10.0	25.0
5	宋沁馨	中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室	19	137	6.0	11.0
6	齐谢敏	南京军区南京总医院药理科	6	19	2.0	4.0
7	邹秉杰	南京军区南京总医院药理科	11	41	4.0	6.0
8	刘琳琳	中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室	3	7	2.0	2.0