摘要:
背景:淫羊藿苷有明确的诱导骨髓基质干细胞分化作用,但是对骨膜细胞诱导并用于动物实验报道较少.聚己内酯三维支架是一种新型的细胞培养三维支架,有可降解、孔径合适、组织相容性好的特点.目的:探讨淫羊藿苷对骨膜细胞的诱导增殖作用,构建骨膜细胞和三维支架复合体组织工程骨并研究其对兔桡骨缺损模型的修复作用,为骨缺损的治疗提供一种新的方式.方法:取兔下颌骨骨膜,组织块法获得原代骨膜细胞后,传代培养第3代并种植于24孔板.实验组分别用10-4,10-3和10-2mol/L的淫羊藿苷加入到相应培养孔中;对照组仅加入等体积的PBS;阳性对照组加入10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子.于第2,4,6和8天用MTT法检测不同组细胞吸光度值.将聚己内酯三维支架置于细胞培养板中,加入10-2mol/L的淫羊藿苷及107L-1的骨膜细胞联合培养,构建骨膜细胞三维支架复合体.建立兔骨缺损模型后,随机分为3组,每组各15只.实验组植入淫羊藿苷诱导形成的骨膜细胞三维支架复合体,聚己内酯组仅植入聚己内酯三维支架,对照组不植入任何材料.分别在植入后第2,4和8周取兔桡骨缺损处行苏木精-伊红染色观察骨愈合情况及成骨细胞的数量;于植入后4周拍摄各组兔桡骨X射线片.结果与结论:①与对照组相比,不同浓度的淫羊藿苷组在不同的时间点均显著促进骨膜细胞增殖(P < 0. 05),尤其是10-2mol/L淫羊藿苷组(P < 0.05),提示淫羊藿苷的最佳浓度为10-2mol/L;②植入后4周,实验组骨细胞数量多,微小血管相对少;聚己内酯组可见较多的新生血管,少量编织样的新生骨和骨细胞;对照组见较多肉芽组织,骨细胞数量较少;植入后8周,对照组骨端可见纤维瘢痕组织,髓腔封闭,形成骨不连;聚己内酯组,骨缺损部分修复;实验组骨缺损部位完全被新生骨所替代,骨缺损修复.实验组成骨细胞数量显著多于其他2组(P < 0.05);③植入后4周X射线情况:实验组骨缺损处基本愈合;聚己内酯组骨痂已经形成,骨断端部分相连;对照组骨缺损间隙仍清晰存在;④结果提示,不同浓度的淫羊藿苷均可促进骨膜细胞增殖,以10-2mol/L最为显著.淫羊藿苷可诱导骨膜细胞在聚己内酯三维支架中形成细胞支架复合组织工程骨,可有效修复兔骨缺损.