一种新型双荧光素酶报告基因表达载体的构建

• 作者: 冯龙 吴建博 孙倩倩 曹珊 李晓娟 王媛媛 赵国强 陈肖楠 马云云
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光素酶报告基因 表达载体 hRLUC
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: R965.1
• 字数: 1971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2017.50.012

摘要

目的:构建一种新型的双荧光素酶报告基因表达载体.方法:设计并扩增海肾荧光素酶基因hRLUC,将其插入到双酶切的含有萤火虫荧光素酶报告基因(Firefly)的载体pGI4.10中,得到pGL4.10-hRLUC;使用lipofectamine3000将pGL4.10和pGL4.10-hRLUC分别转染入HEK293细胞,检测细胞中荧光素酶活性,以未转染细胞作对照.结果:使用PCR方法获得hRLUC表达单元(2 350 bp);双荧光素酶报告基因表达载体pGL4.10-hRLUC经酶切和测序鉴定,插入正确.转染pGL4.10组荧光素酶活性相对值为(220.311 ±2.082);转染pGL4.10-hRLUC的细胞中荧光素酶活性低于pGI4.10转染细胞,高于未转染细胞(P＜0.05).结论:成功构建了双荧光素酶报告基因(hRLUC和Firefly)表达载体.