犬瘟热核衣壳蛋白原核表达及蛋白纯化

• 作者: 刘灵康 吴磊 周瑶 徐小明 徐闰 李连燕 王鹏霞 邢青波 郑喜邦 韦茏芹 韦金鱼
• 来源期刊: 畜牧兽医杂志
• 关键词: 犬瘟热病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65+5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-6704.2018.03.001

摘要

犬瘟热病毒(CDV)是一种单链RNA病毒,作为转录因子合成蛋白,共编码六个结构蛋白,其中核衣壳蛋白N(CDV-N)是保守性较强的免疫原性蛋白,在病毒感染时能引起强烈的抗体反应,对于CDV的诊断具有非常重要的价值.本研究的目的是构建CDV-N蛋白原核表达载体,利用原核表达技术纯化CDV-N蛋白.利用DNAStar软件预测CDV-N蛋白抗原表位,选择588bp截短体用于原核表达.设计引物,以本实验室保存的pMD18-T-CDV质粒为模板,PCR扩增CDV-N588片段,并将其TA克隆至pMD18-T载体.通过酶切鉴定和DNA测序,从pMD18-T-CDV-N588质粒上切取CDV-N588片段,再将其亚克隆至pET30a原核表达载体,构建重组质粒pET30a-CDV-N588.该重组质粒转化大肠杆菌BL21,ITPG在37℃诱导表达His-CDV-N588融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western Blotting加以验证.相同条件下大量增菌诱导,Ni-NTA琼脂糖珠在变性条件下分离纯化His-CDV-N588融合蛋白,再次用SDS-PAGE和Western Blotting进行验证.结果表明:pET30a-CDV-N在大肠杆菌BL21中得到高效表达;SDS-PAGE和Western Blotting检测证实,我们成功纯化了His-CDV-N588融合蛋白.本研究为制备CDV-N588蛋白单克隆抗体和研制胶体金诊断试纸条奠定了基础.