烟酸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸对大鼠缺氧心肌细胞自噬流的影响及机制

• 作者: 叶晶莹 崔琳 张东霞 张均辉 张琼 杨雷 黄跃生
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 缺氧 白噬 溶酶体 烟酸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 821-826
• 页数: 6页
• 字数: 4761字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2018.11.019

摘要

目的 探讨炯酸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)对大鼠缺氧心肌细胞自噬流的影响及机制. 方法 取5只SD大鼠乳鼠,处死后取心脏,制备原代心肌细胞用于以下实验.(1)取原代心肌细胞,按随机数字表法分为常氧组、缺氧9h组、缺氧9 h+NAADP组,每组各5孔.常氧组细胞置于37℃恒温培养箱中常规培养9h;缺氧9h组和缺氧9 h+NAADP组细胞置于缺氧培养箱(含体积分数94％氮气、体积分数5％二氧化碳及体积分数1％氧气)培养9h,缺氧9 h+NAADP组细胞缺氧处理前加入终物质的量浓度10 μmol/L NAADP.细胞计数试剂盒8检测细胞活力.(2)取原代心肌细胞,按随机数字表法分为常氧组、缺氧9h组、缺氧9h+NAADP组、缺氧9 h+trans-Ned-19组及缺氧9 h+ trans-Ned-19+ NAADP组,每组各2孔.常氧组细胞置于37℃恒温培养箱叶常规培养9h;余4组细胞同实验(1)行缺氧处理.缺氧处理前,缺氧9h+NAADP组细胞加入终物质的量浓度10 μmol/L NAADP,缺氧9 h+trans-Ned-19组细胞加入终物质的量浓度1 μmol/L trans-Ned-19,缺氧9 h+ trans-Ned-19+ NAADP组细胞加入终物质的量浓度10 μmol/L NAADP和1μmol/L trans-Ned-19.蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型和P62的表达量.(3)取原代心肌细胞,同实验(1)进行分组及处理.免疫荧光法检测溶酶体的酸碱度.对数据行单因素方差分析和LSD检验. 结果 (1)常氧组细胞活力为1.114±0.024,明显高于缺氧9h组的0.685±0.079,P＜0.01.缺氧9h+NAADP组细胞活力为0.886 ±0.061,明显高于缺氧9h组(P＜0.05).(2)与常氧组比较,缺氧9h组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型及P62表达量明显升高(P＜0.01).与缺氧9h组比较,缺氧9h+NAADP组细胞P62表达量明显下降(P＜0.01),微旨相关蛋白 1轻链3-Ⅱ型表达量无明显变化(P＞0.05);缺氧9 h+ trans-Ned-19组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型及P62表达量均无明显变化(P＞0.05).与缺氧9h+NAADP组比较,缺氧9 h+trans-Ned-19+ NAADP组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型表达量无明显变化(P＞0.05),P62表达量明显升高(P＜0.01).(3)常氧组细胞绿色荧光强度大,与红色荧光共染好,溶酶体内环境酸性较强.缺氧9h组细胞绿色荧光强度明显低于常氧组,溶酶体内环境酸性较常氧组减弱.缺氧9 h+NAADP组细胞绿色荧光强度较缺氧9h组明显增强,溶酶体内环境酸性较缺氧9 h组强,但仍低于常氧组. 结论 NAADP通过酸化缺氧后心肌细胞溶酶体内环境,促进自噬体降解,减少自噬溶酶体堆积,修复受损自噬流从而改善心肌细胞活力.