采用IMS-RT-PCR方法快速检测肉制品中大肠杆菌O157

• 作者: 凌娇 孙卫东 熊挺 王权 蒋蔚 陈永军 陈芸 韩阳瑞 龙梦瑶
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 免疫磁珠分离法(IMS) 荧光定量PCR (RT-PCR) 肉制品 肠出血性大肠杆菌O157 O-特异性多糖(O-SP)
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 68-76
• 页数: 9页
• 分类号: S851.34
• 字数: 7211字
• 语种: 中文

摘要

建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)与实时荧光定量PCR (Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)技术相结合快速检测肉制品中肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157的方法.利用改良热酚-水法提取EHEC O157的O-特异性多糖(O-specificpolysaccharides,O-SP)作为筛选抗原,制备抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体.将PM 3-50纳米磁珠经3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化后,与抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体结合,得到偶联量为150 μg/mg的免疫磁珠.免疫磁珠的最高捕获量为13748.33 CFU/0.2 mg,在肉制品中特异性捕获的最低检测限为2.2 CFU/mL.根据EHEC 0157血清型的特异性基因rfbE(GenBank登录号:S83460)设计引物和荧光探针,将IMS与RT-PCR相结合进行检测EHEC O157.当肉制品中EHEC O157含量≥1 CFU/g(2.5g样本),免疫磁珠能捕获,并通过EC肉汤培养基增殖3h后,RT-PCR即可成功检测,全程只需6-7 h.IMS-RT-PCR相结合的检测方法,在大大缩短了检测时间的基础上,再次降低了EHEC O157的检测限,在防范肉制品源性致病性EHEC O157传染方面具有重要意义.