细粒棘球蚴EG19抗原基因的克隆表达及重组蛋白反应原性研究

• 作者: 乔军 刘田莉 孟庆玲 才学鹏 王熙凤 贡莎莎 钟文强 陈英 黄运福
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 细粒棘球蚴 Eg19抗原基因 克隆 表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 分类号: S811.5
• 字数: 4199字
• 语种: 中文

摘要

为研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)中的原头蚴特异性抗原Eg19蛋白的反应原性,根据GenBank中Eg19抗原基因cDNA序列设计特异性引物,以Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到pMD19-T载体,测序验证后,将Eg19抗原基因亚克隆至表达载体pET-32a中,构建pET-Eg19原核表达载体,将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析.结果Eg19 cDNA全长534个核苷酸,编码177个氨基酸,等电点为4.54.该多肽含有2个N端酰基化位点,1个PKC磷酸化位点,1个CKⅡ磷酸化位点,1个ATP/GTP结合位点基序A(P-loop);抗原表位区集中在20～ 93、96～146位;为亲水性蛋白.SDS-PAGE可以检测到35 kDa的蛋白特异性条带;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg19抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有较强的反应原性,为进一步利用Eg19抗原蛋白作为Eg感染诊断中的候选抗原奠定了前期基础.