一种快速检测猪伪狂犬病毒野毒株的普通PCR方法的优化研究

• 作者: 侯文凤 李中圣 王凤求 王贵平
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪伪狂犬病毒 野毒株 正交试验 PCR 快速检测 鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 138-141
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+9.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.06.0357

摘要

为了快速、便捷运用普通PCR对猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)野毒株进行检测,试验选取PRV gB、gE基因保守区序列,设计2对特异性引物,通过正交试验设计探索最优水平组合的PCR体系,建立鉴别检测PRV野毒株的普通PCR方法,并验证其特异性、敏感性、重复性、稳定性以及对临床样品的检测效果.结果表明:PCR体系的最优水平组合为Taq Mix 8μL,gB、gE引物的终浓度分别为0.2 μmol/L和0.2μmol/L.建立的普通PCR检测体系仅对PRV野毒株呈双阳性,对疫苗株gB基因呈单阳性,检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪乙型脑炎病毒、大肠杆菌等均显示阴性;敏感度介于1×103 ～1×104TCID50/mL病毒效价之间;重复性与稳定性良好;检测20份广东地区猪场临床疑似样品,疫苗毒株阳性率为25％,野毒株阳性率为10％,gB、gE单项PCR检测的符合率为100％.说明试验优化建立的普通PCR方法能对PRV野毒株进行快速鉴别诊断.