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靶向人MGMT的shRNA干扰载体的构建与鉴定
靶向人MGMT的shRNA干扰载体的构建与鉴定
作者:
冯城婷
史悦
李大鹏
李玮
梁容瑞
石凤灵
胡颖熹
赵晶
陶敏
原文服务方:
现代仪器与医疗
shRNA
hMGMT
基因沉默
肝癌细胞
摘要:
目的:有效构建针对人MGMT(hMGMT)基因的short hairpin RNA(shRNA)质粒表达载体,转染肝癌SMMC-7721细胞,验证shRNA对肝癌SMMC-7721细胞MGMT基因的干扰效果,进一步研究hMGMT的功能及临床意义.方法:设计针对hMGMT mRNA靶序列的shRNA,PCR扩增获得目的产物,通过TA克隆目的产物与酶切后的载体片段进行连接,连接后的重组载体转化到大肠杆菌,提取质粒后送测序鉴定.脂质体包裹鉴定后的重组载体,转染肝癌SMMC-7721细胞,利用Real-Time PCR及Western Blot检测RNA干扰效果.结果:重组克隆经菌落PCR及测序证实插入的序列正确,RNA干扰载体转染肝癌SMMC-7721细胞后细胞内MGMT的mRNA及蛋白水平均显著降低.结论:所制备的hMGMT-shRNA在肝癌SMMC-7721细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,针对hMGMT为靶标的shRNA载体能够有效下调肝癌细胞中MGMT基因的表达,为研究MGMT蛋白的功能以及临床肿瘤合理用药提供思路.
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篇名
靶向人MGMT的shRNA干扰载体的构建与鉴定
来源期刊
现代仪器与医疗
学科
关键词
shRNA
hMGMT
基因沉默
肝癌细胞
年,卷(期)
2018,(6)
所属期刊栏目
临床研究
研究方向
页码范围
50-53
页数
4页
分类号
R733
字数
语种
中文
DOI
10.11876/mimt201806019
五维指标
传播情况
被引次数趋势
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版权信息
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shRNA
hMGMT
基因沉默
肝癌细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
现代仪器与医疗
主办单位:
中国科学器材公司
出版周期:
双月刊
ISSN:
2095-5200
CN:
10-1084/TH
开本:
大16开
出版地:
邮发代号:
创刊时间:
1995-01-01
语种:
chi
出版文献量(篇)
3895
总下载数(次)
0
总被引数(次)
20339
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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