猪Nhlh2基因启动子活性及其表达调控的初步研究

• 作者: 刘发伟 张哲 张豪 李加琪 林长光 温丽娟 袁晓龙 陈子韬
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 Nhlh2基因 启动子活性 转录调控元件
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 667-674
• 页数: 8页
• 分类号: S828.2
• 字数: 4782字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.04.002

摘要

旨在研究母猪Nhlh2基因启动子活性及其与转录因子之间的调控关系,为探索该基因的表达调控提供分子水平的依据,也为研究母猪繁殖机制提供一定的参考.本研究以猪卵巢组织DNA为模板,PCR扩增Nhlh2不同长度的启动子缺失片段,克隆到pGL3-basic载体构建启动子报告基因重组质粒,并将其转染到猪卵巢颗粒细胞,测定相对双荧光素酶活性值;通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP),研究Nhlh2启动子与YY1、C/EBPβ蛋白之间的相互作用;随后构建转录因子超表达、突变载体和小干扰RNA(siRNA),利用双荧光素酶检测系统进行活性验证.经双荧光素酶报告系统检测发现,Nhlh2基因的P7(-238～+129)区域启动子转录活性最高,-654～-238片段范围可能存在负调控元件,-238～-20区域可能存在正调控元件;通过生物信息学分析和ChIP验证,Nhlh2启动子区-101～-85和-153～-140区域分别是转录因子YY1和C/EBPβ的结合位点;突变YY1和C/EBPβ的结合位点后,P7的双荧光活性显著上调;超表达YY1和C/EBPβ后,P7的双荧光活性显著下调;干扰YY1和C/EBPβ的表达后,P7的双荧光活性显著上调.本研究确定了猪Nhlh2基因的核心启动子区域为-238～+129,YY1和C/EBPβ分别结合在Nhlh2基因启动子区的-101～-85和-153～-140区域,抑制猪Nhlh2基因的转录活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张豪	华南农业大学动物科学学院	48	298	10.0	15.0
2	李加琪	华南农业大学动物科学学院	57	384	11.0	17.0
3	林长光		10	66	4.0	8.0
4	袁晓龙	华南农业大学动物科学学院	6	6	1.0	2.0
5	张哲	华南农业大学动物科学学院	12	63	4.0	7.0
6	温丽娟	华南农业大学动物科学学院	1	1	1.0	1.0
7	刘发伟	华南农业大学动物科学学院	1	1	1.0	1.0
8	陈子韬	华南农业大学动物科学学院	1	1	1.0	1.0