Fh8明显增强PCV2 Cap蛋白的可溶性表达及抗原性

• 作者: 何孔旺 孙小涵 张碧成 张雪寒 汪伟 牛家强 郭芸芸
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 结构蛋白 Fh8 可溶性表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 356-360
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65+9.2
• 字数: 3965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2018.02.019

摘要

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的主要功能蛋白Cap蛋白,很难在体外获得可溶性表达.本研究旨在以Fh8蛋白为融合标签实现PCV2 ORF2基因在大肠杆菌中的可溶性表达,以小鼠评价可溶性Cap蛋白的抗原性.以病毒基因组为模板,扩增ORF2靶基因,插入pCold原核表达质粒,成功构建的pCold-ORF2阳性质粒转入大肠杆菌BL21中.利用SDS-PAGE分析Cap蛋白的可溶性表达情况,利用Western blotting鉴定Cap蛋白的反应原性.重组蛋白与佐剂乳化制备免疫原,免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中Cap抗体,利用PCR检测组织脏器中病毒载量,以评估可溶性Cap蛋白的免疫原性.PCR结果表明,Fh8和PCV2 ORF2基因被成功扩增.SDS-PAGE结果表明Fh8标签显著提高了ORF2在大肠杆菌中的可溶性表达,分子量35000.Western blotting结果显示,猪PCV2阳性血清能够特异性的识别可溶性Cap蛋白.小鼠一次接种Cap蛋白28 d后,抗体全部转阳,免于PCV2的攻击.表明通过新型小标签实现了PCV2 ORF2基因的可溶性表达,且具有良好的免疫原性.