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摘要:
目的 探讨靶向双唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside,GD2)的嵌合抗原受体(chime-ric antigen receptor,CAR)转染NK-92细胞后(GD2-CAR-NK-92细胞),对GD2+神经母细胞瘤(neu-roblastoma,NB)细胞的靶向治疗作用.方法 利用分子克隆技术从含靶标GD2的质粒上获得GD2-CAR编码序列,通过电泳和测序鉴定后,将GD2-CAR片段克隆到慢病毒载体上,然后用慢病毒对NK-92细胞进行转染,建立GD2-CAR-NK-92细胞.利用流式细胞术和蛋白免疫印迹方法检测目的蛋白在GD2-CAR-NK-92细胞上的表达.利用非放射性细胞毒性方法检测GD2-CAR-NK-92细胞对GD2+的NB细胞的靶向杀伤作用.结果 电泳和测序结果显示GD2-CAR的序列正确,转染NK-92细胞后,GD2-CAR在GD2-CAR-NK-92细胞上的阳性表达率为98.4%.GD2-CAR-NK-92细胞对GD2+的NB细胞株BE(2)-C的杀伤率为37.53%±0.34%,远远高于未被基因修饰的NK-92细胞(pCDH-NK-92和亲代NK-92)的杀伤率(6.03%±1.71%和6.07%±2.06%),差异有统计学意义(P<0.001).而GD2-CAR-NK-92对GD2-的NB细胞株SK-N-SH的杀伤率为30.90%±0.25%,与未被基因修饰的NK-92细胞(pCDH-NK-92和亲代NK-92)的杀伤率(33.73%±1.50%和34.77%±2.54%)相似,差异没有统计学意义(P>0.05).结论 构建表达靶向GD2-CAR基因的慢病毒载体,并转染NK-92细胞,所形成的嵌合抗原受体可在NK-92细胞上正确表达.GD2-CAR-NK-92细胞对GD2+的NB细胞有显著的靶向杀伤作用,为嵌合抗原受体技术治疗NB的临床转化应用提供了体外实验依据.
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文献信息
篇名 嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞对GD2+神经母细胞瘤靶向治疗的实验研究
来源期刊 中华小儿外科杂志 学科
关键词 神经母细胞瘤 靶向治疗 自然杀伤细胞 抗原受体
年,卷(期) 2018,(3) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 225-230
页数 6页 分类号
字数 4667字 语种 中文
DOI 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2018.03.013
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神经母细胞瘤
靶向治疗
自然杀伤细胞
抗原受体
研究起点
研究来源
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研究去脉
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相关学者/机构
期刊影响力
中华小儿外科杂志
月刊
0253-3006
42-1158/R
大16开
武汉市胜利街155号
38-19
1980
chi
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