结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR检测体系的建立和应用

• 作者: 吕翎娜 孙琦 张宗德 李自慧 杜博平 潘丽萍 贾红彦
• 来源期刊: 北京医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 聚合酶链式反应 微滴数字PCR IS6110 1S1081
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 314-317,322,后插4
• 页数: 6页
• 字数: 3306字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15932/j.0253-9713.2018.04.007

摘要

目的 建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测体系,并用于不同类型临床样本的检测.方法 常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA,9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA,12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA.设计合成IS6110和IS1081扩增引物和检测探针,建立ddPCR检测体系.应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数,进行统计学分析.结果 建立了能同时检测IS6110和IS1081的ddPCR体系,该体系检测2个靶标的线性范围分别为0.5～8 733和0.2～2 893拷贝/μl反应体系.该体系具有较好的重复性(r＞0.95),以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100％.在痰和血浆DNA样本检测中,2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组.结论 结核分枝杆菌特异性核酸的ddPCR体系,可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测,对提高结核病病原学诊断能力有重要意义.