猪丁型冠状病毒与猪流行性腹泻病毒双重实时荧光定量RT-PCR方法的建立和初步应用

• 作者: 侯林杉 刘宝京 左玉柱 师乾凯 罗尚星 范京惠
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪丁型冠状病毒 猪流行性腹泻病毒 实时定量PCR 临床检测
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 852-858
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6|S854.43
• 字数: 4835字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.04.025

摘要

猪丁型冠状病毒(PDCoV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)均为致病性冠状病毒,可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡.为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT PCR方法,根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列,设计了两对特异性引物,分别扩增其N、M基因保守区,并将其克隆至pMD19-T载体;将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板,建立了一种检测PDCoV和PEDV的双重的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,并对其反应的敏感度、特异性和重复性进行了检测.结果表明,本试验所建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法对PDCoV和PEDV的最低检测量分别为51和32拷贝·μL-1,且与PBoV、TGEV、PRV、PCV2无交叉反应,特异性较好;对2016年至2017年在河北省收集的130份仔猪腹泻样本检测,结果显示,PDCoV的检出率为16.9％,PEDV的检出率为66.2％,二者同时感染的检出率为2.3％,与普通RT-PCR检测方法相比,敏感性更高.本研究为PDCoV和PEDV的诊断及分子流行病学调查提供了一种快速、定量检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范京惠	河北农业大学动物医学院	56	237	9.0	13.0
2	左玉柱	河北农业大学动物医学院	86	419	10.0	17.0
6	罗尚星	河北农业大学动物医学院	10	27	3.0	4.0
7	刘宝京	河北农业大学动物医学院	13	29	3.0	4.0
8	师乾凯	河北农业大学动物医学院	6	12	1.0	3.0
9	侯林杉	河北农业大学动物医学院	6	12	1.0	3.0