猪TAK1基因的cDNA全长克隆、时空表达及亚细胞定位分析

• 作者: 任梦可 吴伟 张朋朋 徐永杰 徐海霞 李瑞 王素莹
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 TAK1 骨骼肌 克隆 表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 页码范围: 68-75
• 页数: 8页
• 分类号: S828
• 字数: 6366字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.05.009

摘要

为了研究转化生长因子 β 激活激酶1(Transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)在猪骨骼肌生长发育中的作用,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得猪TAK1的cDNA全长,并分析其时空表达及真核细胞中的亚细胞定位情况.结果表明,TAK1 cDNA全长2163 bp(GenBank登录号:KU504629),ORF为1740 bp,编码579个氨基酸,其氨基酸序列与人、恒河猴、绵羊的相似性均为98.8％,表明该蛋白在不同物种间高度保守.猪TAK1蛋白具有催化丝氨酸/酪氨酸磷酸化的STKc TAK1结构域,而在该结构域中还有多个保守的ATP结合位点、A-Loop结构域、TAB1(TGF-beta activated kinase 1)结合位点.荧光定量PCR结果显示,TAK1基因在出生后120 d大白猪的免疫器官脾脏中表达量最高,胰腺、背最长肌等组织中的表达量较低;而不同发育时期的背最长肌中,该基因在胚胎期65 d表达量最高,随着生长发育表达量下调;在不同品种间,TAK1基因在各时期大白猪中的表达量均高于梅山猪,除出生后90 d外,其他时期差异均达到显著水平或极显著水平.pcDNA3.1(+)-EGFP-TAK1重组质粒转染C2C12细胞后的荧光共定位结果显示,TAK1蛋白的表达主要集中在细胞质中.综上,TAK1基因在猪骨骼肌发育过程中起着重要作用,为进一步研究猪TAK1基因的功能奠定了基础.