苦参热应激蛋白HSP17.8的体外表达及生物信息学分析

• 作者: 吴家文 廖怡 胡雪瑞 赵德蕊
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 热应激蛋白 聚合酶链式反应 生物信息学
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2018.01.015

摘要

利用聚合酶链式反应从苦参植物叶片中扩增出热应激蛋白基因hsp编码区序列,并成功构建了pET22b-hsp原核表达载体,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,在不同温度、时间和不同浓度的IPTG诱导下实现了HSP的体外表达,获得了hsp编码区序列,长度为498 bp,编码166个氨基酸,分子质量约17.8 ku的小分子热应激蛋白(HSP17.8).对此蛋白的物理化学性质、同源进化树、二级结构以及三维结构等生物信息学分析表明:HSP17.8为稳定的亲水性蛋白,其具有多个N-豆蔻酰化位点、磷酸化位点和N-糖基化位点;与羽扇豆应激蛋白HSP的同源性最高,亲缘关系最近;HSP17.8蛋白的结构特点是α螺旋与β折叠依次出现,形成了β1-α1-β2-α2-β3-α3-β4-α4-β5的折叠方式,且同一方向的β折叠被α螺旋包裹在空间结构的内部,构成了立体结构的框架.首次从苦参中成功克隆热应激蛋白基因hsp17.8编码区序列,并在体外得到了其最佳的诱导表达条件,分析了HSP17.8的理化特性、进化关系及结构特点,为该蛋白结构、功能研究奠定了实验基础.