白丝北里孢菌L-谷氨酸氧化酶的异源表达及酶学性质分析

• 作者: 丁重阳 张梁 李由然 石贵阳 陈稳 顾正华
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 白丝北里孢菌 L-谷氨酸氧化酶 α-酮戊二酸 异源表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 58-65
• 页数: 8页
• 分类号: Q814
• 字数: 7577字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201802010

摘要

为实现从L-谷氨酸到α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)的高效生物转化,将来源于白丝北里孢菌(Kitasatospora setae KM-6054)的L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)在大肠杆菌(Escherichia coli)中实现异源表达,并研究其酶学特性.根据LGOX的氨基酸序列和大肠杆菌系统偏好性合成LGOX全基因序列,并通过pET28a(+)/DE3系统在大肠杆菌中实现了功能表达.诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)终浓度为0.1 mmol/L,20℃诱导18h,重组大肠杆菌粗酶液酶活力可达49.10 U/mL.亲和层析获得酶比活力为45.98 U/mg纯酶,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳条带显示蛋白分子质量大小约为70 kDa.酶学性质研究表明:其最适反应温度和pH值分别为40℃和6.0;Km值为1.23 mmol/L,Vmax值为76.24 μmol/ (min·mg),L-谷氨酸为该酶的最适底物.本研究确定了LGOX在E.coli BL21中的异源表达及酶学特性,为生物转化合成α-KG提供了新的参考途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁重阳	江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室生物工程学院	52	441	12.0	19.0
2	张梁	江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室生物工程学院	86	530	12.0	16.0
3	顾正华	江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室生物工程学院	17	137	5.0	11.0
4	李由然	江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室生物工程学院	19	49	4.0	6.0
5	陈稳	江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室生物工程学院	1	4	1.0	1.0