河南华溪蟹生殖调控分子VASA的原核表达、抗体制备及免疫鉴定

• 作者: 孙敏 杜晓琳 王兰
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 河南华溪蟹 VASA蛋白 原核表达 抗体制备 免疫鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 页码范围: 1181-1188
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 5615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20170810926

摘要

为了研究生殖调控分子VASA在河南华溪蟹性腺发育过程中的表达模式和功能,本研究制备了VASA蛋白特异的多克隆抗体.选取河南华溪蟹vasa基因813 bp的特异区段,克隆到pET32a载体,构建了原核表达载体pET32a-Shvasa,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达和SDS-PAGE检测.结果显示,47 ku的VASA融合蛋白在菌液上清液中大量存在.VASA融合蛋白经Ni-NTA His-Bind亲和层析柱分离纯化后,免疫新西兰大白兔,制备了河南华溪蟹VASA蛋白的多克隆抗体.ELISA检测显示,VASA蛋白多克隆抗体的效价高达1.0×105.进一步通过免疫吸附实验和Western blot方法鉴定抗体特异性,研究表明,获得的多克隆抗体不仅能识别VASA融合蛋白,而且能特异识别河南华溪蟹卵巢中的天然VASA蛋白.研究为鉴定河南华溪蟹及其他蟹类生殖细胞提供了有效手段,为进一步解析十足目动物VASA蛋白的功能提供了分子基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙敏	山西大学生命科学学院	43	249	7.0	14.0
2	王兰	山西大学生命科学学院	123	1118	16.0	28.0
3	杜晓琳	山西大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0