10种猪常见病毒基因芯片检测方法的建立及初步应用

• 作者: 姜帆 尹燕博 张小龙 徐彪 房保海 杨宗统 王冬冬 王守春 王群 石玲玲 罗宁
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪病毒 PCR 基因芯片 检测
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 2249-2260
• 页数: 12页
• 分类号: S858.285.3
• 字数: 7423字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.10.021

摘要

旨在建立一种可同步检测猪10种常见疫病病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine, TGEV)、猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)、猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)和口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)的基因芯片检测技术,为临床病料的初步诊断及流行病学调查提供一个新的可靠方法.对10种病毒基因的序列进行分析,设计引物对靶基因进行PCR扩增,将纯化后的靶基因点制成芯片,通过Cy3标记特异性引物扩增病毒得到具有荧光标记的探针,然后与芯片进行杂交,扫描分析结果,建立其基因芯片检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行检测.应用建立的基因芯片检测方法和普通PCR/RT-PCR方法对1 006份样品进行符合检测.试验结果表明,基因芯片检测10种病毒特异性好、灵敏度高,最低检测限度可达105 copies·μL-1,检测中,基因芯片与普通PCR/RT-PCR对1 006份临床样品的检测符合率为96.79％以上.初步研究表明,该基因芯片技术可同时同步检测10种猪疫病病毒,可应用于临床病料的初步诊断.