副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

• 作者: 万莹 凌娇 潘翠玲 王权 白雪瑞 蒋蔚
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 副溶血弧菌 霍乱弧菌 toxR ompW 双重荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 93-99
• 页数: 7页
• 分类号: S855.1
• 字数: 4221字
• 语种: 中文

摘要

建立一种基于TaqMan探针法同步定量检测副溶血弧菌和霍乱弧菌的双重荧光定量PCR方法.根据副溶血弧菌toxR基因和霍乱弧菌ompW基因设计特异性引物与TaqMan探针.toxR和ompW探针5'端分别标记FAM、CY5荧光报告基团,3'端均标记BHQ1荧光淬灭基团.结果显示:该方法的副溶血弧菌和霍乱弧菌最低检测限均达到10 CFU/mL,灵敏度高;特异性试验表明这两种细菌与其他病原菌(大肠杆菌O157、沙门氏菌、拟态弧菌、创伤弧菌)无交叉反应;批间和批内重复性实验表明变异系数均小于1.5％,说明重复性好.采用人工染菌虾肉样品,副溶血弧菌和霍乱弧菌的最低检测限分别为100CFU/mL和50 CFU/mL,人工染菌贝类样品的最低检测限分别为50 CFU/mL和50 CFU/mL.两种细菌在虾肉中富集2h后的最低检出限均为1 CFU/mL.结论:本研究所建立的双重荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的特点,包括DNA提取的整个检测过程可在1至3h内完成,是同时快速检测副溶血弧菌和霍乱弧菌的有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王权	中国农业科学院上海兽医研究所	65	346	11.0	15.0
2	潘翠玲	南京农业大学动物医学院	26	329	11.0	17.0
3	蒋蔚	中国农业科学院上海兽医研究所	25	104	6.0	9.0
4	万莹	南京农业大学动物医学院	4	6	2.0	2.0
8	凌娇	南京农业大学动物医学院	5	7	2.0	2.0
12	白雪瑞	南京农业大学动物医学院	3	7	2.0	2.0