基于CRISPR/Cas9系统构建FOXA2表达示踪体系

• 作者: 刘昱翔 卜会铜 张振旺 程浩杰 谭拥军 谭桂湘
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因编辑 FOXA2 示踪 乳腺癌 MCF-7 上皮间质转化
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基因编辑专题
• 页码范围: 80-86
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0111

摘要

利用CRISPR/Cas9系统在基因FOXA2蛋白质编码区后插入绿色荧光蛋白核酸序列,实现对FOXA2基因开启和关闭的示踪.通过靶向序列选择、Cas9靶向质粒及Donor片段的克隆、细胞转染并进行流式细胞荧光分选、阳性细胞有限稀释、富集培养及单克隆细胞的鉴定和转录翻译水平验证等5个方面,进行实验研究.在编辑的乳腺肿瘤细胞MCF-7中,绿色荧光蛋白有效表达;乳腺癌细胞内绿色荧光蛋白的表达水平同FOXA2蛋白的表达水平正相关,且经肿瘤细胞上皮间质转化进程诱导因子EGF的诱导,绿色荧光蛋白和FOXA2表达水平同步降低.方法学上CRISPR/Cas9靶向FOXA2并利用细胞内同源性定向修复插入绿色荧光蛋白序列成功;利用报告基因蛋白表达水平示踪目的基因的开启、关闭及表达量高低结果准确、方法简单,效果明显.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程浩杰	湖南大学生物学院	1	0	0.0	0.0
2	张振旺	湖南大学生物学院	3	6	1.0	2.0
3	谭桂湘	湖南大学生物学院	8	7	2.0	2.0
4	刘昱翔	湖南大学生物学院	1	0	0.0	0.0
5	卜会铜	湖南大学生物学院	1	0	0.0	0.0
6	谭拥军	湖南大学生物学院	14	25	3.0	4.0