利用CRISPR/Cas9系统在小鼠胚胎干细胞中进行 miR-22的功能研究

• 作者: 任文燕 张文胜 张雪 戴红霞 陈亮亮
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 小鼠胚胎干细胞 CRISPR/Cas9 miR-22
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基因编辑专题
• 页码范围: 71-79
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0964

摘要

旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用.首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-22的sgRNA表达载体,电转至稳转Cas9的小鼠胚胎干细胞中;其次经药物筛选、基因型鉴定等步骤筛选miR-22纯合缺失的小鼠胚胎干细胞.RT-qPCR手段证实miR-22在小鼠胚胎干细胞中被成功敲除,纯合突变体的比例约为6.67％.此外,miR-22缺失并未影响胚胎干细胞的细胞形态以及Oct4、Sox2和Nanog等干性基因的表达.因此,miR-22对小鼠胚胎干细胞的干性维持并非必需,而对胚胎干细胞谱系分化和命运决定的影响还有待进一步研究.