组织蛋白酶D调控皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的研究

• 作者: 许庆芳 许新雅 赖维 郑跃 陆春 黄云芬 黎钰莹 龚子鉴
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 组织蛋白酶D 成纤维细胞 糖基化终产物,高级 降解
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 647-652
• 页数: 6页
• 字数: 5247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2018.09.003

摘要

目的 探究组织蛋白酶D(CatD)对皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的晚期糖基化终末产物(AGE)的调控作用.方法 分别以CatB+CatL、CatD以及20S蛋白酶体的酶活性抑制剂CA074Me、天冬氨酸酶抑制剂(pepstatin A)、MG-132处理皮肤成纤维细胞,CCK8和荧光法检测细胞活性及蛋白酶活性.CA074Me、pepstatin A、MG-132组分别加入AGE-BSA孵育8h,而对照组加入磷酸盐缓冲液(PBS).孵育8h后,置换含相应抑制剂的新鲜培养基继续培养24 h,流式细胞仪检测各时间点胞内AGE-BSA平均荧光强度.以不同浓度pepstatin A(37.5、75、150 μmol/L)或PBS处理皮肤成纤维细胞,加入AGE-BSA孵育,方法同前,ELISA检测各时间点胞内AGE-BSA平均浓度,计算降解率.慢病毒转染皮肤成纤维细胞,设空白对照组、空载病毒转染组、CatD高表达慢病毒转染组,荧光显微镜观察,RT-PCR、Western印迹法和荧光法检测各组CatD mRNA和蛋白表达及酶活性.分别加入AGE-BSA孵育,处理及检测方法同前,计算降解率.结果 1μmol/L CA074Me组、75 μmol/L pepstatinA组及1μmol/L MG-132组细胞增殖活性均在90％以上,与对照组(100％)差异无统计学意义(F=1.525,P＞0.05).去除AGE-BSA 24 h后,CA074Me+ AGE-BSA组和MG-132+ AGE-BSA组胞内AGE-BSA荧光强度(275.00±10.15、259.00±11.14)均较其相应8h点荧光强度(295.00±6.56、285.67±8.74)显著下降(配对t值分别为4.778、6.154,均P＜0.05),而pepstatin A+AGE-BSA组8h和32 h点细胞内AGE-BSA荧光强度差异无统计学意义(均P＞0.05).37.5、75和150 μmol/LpepstatinA组24 h内对吞人胞内AGE-BSA的降解率分别为9.64％±1.27％、5.62％±0.47％和3.21％±0.73％,各组间差异有统计学意义(F=45.876,P＜0.05),且该降解率随pepstatin A浓度增加而降低(P＜0.05).荧光显微镜下观察,空白对照组细胞未见荧光,空载病毒转染组和CatD高表达慢病毒转染组细胞荧光阳性率均在80％以上.CatD高表达慢病毒转染组CatD mRNA、蛋白表达及活性均较另2组显著上调(均P＜ 0.05).CatD高表达慢病毒转染+AGE-BSA组24 h内AGE-BSA的降解率显著高于AGE-BSA组和空载病毒转染+AGE-BSA组(均P＜0.05).结论 CatD可促进皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的AGE-BSA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖维	中山大学附属第三医院皮肤科	291	1353	17.0	24.0
2	陆春	中山大学附属第三医院皮肤科	230	801	13.0	19.0
3	郑跃	中山大学附属第三医院皮肤科	59	181	6.0	11.0
4	许庆芳	中山大学附属第三医院皮肤科	47	176	7.0	9.0
5	龚子鉴	中山大学附属第三医院皮肤科	39	211	7.0	13.0
6	许新雅	中山大学附属第三医院皮肤科	3	7	2.0	2.0
7	黄云芬	中山大学附属第三医院皮肤科	3	7	2.0	2.0
8	黎钰莹	中山大学附属第三医院皮肤科	2	3	1.0	1.0