TLR4-PI3K-Rac1通路对巨噬细胞骨架及吞噬功能的影响

• 作者: 刘晓菊 包海荣 曾晓丽 李飞 陈金丽
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 巨噬细胞 Toll样受体4 细胞骨架 吞噬作用
• 年，卷（期）: 2018,（34）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2743-2748
• 页数: 6页
• 字数: 4413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2018.34.013

摘要

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)信号通路对巨噬细胞骨架重排及吞噬功能的影响.方法 小鼠巨噬细胞系RAW264.7分为空白组、阴性对照组及TLR4-RNA干扰(RNAi)组.将携带TLR4基因短发卡RNA(shRNA)的慢病毒颗粒及携带无意义对照序列慢病毒颗粒分别转染至TLR4-RNAi组及阴性对照组,空白组不进行转染.Western印迹法检测TLR4基因沉默效率.实时荧光定量PCR检测各组细胞PI3K、Rac1 mRNA的表达,Western印迹法测各组细胞PI3K、磷酸化Rac1(p-Rac1)、Rac1蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化.流式细胞术检测各组细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,用平均荧光强度(MFI)和吞噬细胞百分比(吞噬％)表示.结果 TLR4-shRNA慢病毒可成功转染RAW264.7细胞,转染效率为80％ ～90％,TLR4基因沉默效率为(63±4)％.沉默TLR4后,TLR4-RNAi组TLR4 mRNA和蛋白相对表达量(0.20±0.03、0.37±0.04)、PI3K mRNA和蛋白相对表达量(0.64±0.06、0.75±0.06)以及Rac1 mRNA、蛋白和p-Rac1蛋白相对表达量(0.75±0.04、0.76±0.01、0.74±0.05)均显著低于阴性对照组和空白组(均P<0.01).细胞骨架变化:沉默TLR4后细胞伪足伸出短少、僵硬,吞噬FITC-E.coli能力较弱,空白组和阴性对照组细胞伪足伸出良好,吞噬FITC-E.coli能力强.吞噬FITC-E.coli能力:TLR4-RNAi组MFI和吞噬％[(7453±564)、(70.20±2.27)％]均显著低于空白组和阴性对照组(均P<0.01).基础状态下及沉默TLR4后,TLR4、PI3K、Rac1 mRNA、蛋白表达与MFI、吞噬％均呈正相关(均P<0.05).结论 TLR4-PI3K-Rac1通路参与巨噬细胞骨架的重排,降低巨噬细胞的吞噬能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李飞	兰州大学第一医院老年呼吸科	28	355	10.0	18.0
2	刘晓菊	兰州大学第一医院老年呼吸科	54	524	13.0	20.0
3	包海荣	兰州大学第一医院老年呼吸科	43	390	11.0	17.0
4	曾晓丽	兰州大学第一医院老年呼吸科	29	296	11.0	16.0
5	陈金丽	兰州大学第一医院老年呼吸科	1	2	1.0	1.0