白曲酸性蛋白酶在无孢黑曲SH-2中的克隆表达及酶学性质分析

• 作者: 潘力 王斌 董文超
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: 白曲酸性蛋白酶 无孢黑曲SH-2 重组表达
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 80-87
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2018.6.012

摘要

白曲霉酸性蛋白酶在白酒酿造发酵过程中具有溶解发酵原料的颗粒,促进微生物繁殖,分解蛋白质生成香味物质,降解酵母菌体蛋白等多种功能,可以提高白酒风味,因此被广泛应用于白酒生产中.本研究利用经基因工程改造的低内源蛋白背景的黑曲霉宿主SH-2,表达白曲霉酸性蛋白酶基因pepB.通过PCR技术获得pepB以及表达元件糖化酶启动子PglaA、糖化酶终止子TglaA、乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶标记基因pyrG,在pMD18-T载体基础上,构建了pepB表达载体,通过PEG介导转化法转化无孢黑曲酶SH-2.重组菌株经发酵罐发酵240 h,发酵粗酶液酶活达9722 U/mL,是报道的白曲原始菌株酶活的8.5倍,SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为47 ku.酶学性质分析结果表明,该酸性蛋白酶最适反应温度为35℃,最适pH为4.0,Mn2+、Cu2+对酶活有显著地激活作用.最后,探究了在不同发酵初始pH下重组菌株酶活的变化,结果显示,在pH 4.5～6.5范围内,适当提高发酵初始pH,酸性蛋白酶酶活会提高.以上结果表明,本研究成功构建了一株能胞内高效表达白曲酸性蛋白酶的菌株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘力		71	587	16.0	20.0
2	王斌		54	380	12.0	18.0
3	董文超		1	0	0.0	0.0