山羊伪结核棒状杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

• 作者: 李志明 李文贵 邬培昆 邵庆勇 郑国英 马玉馨 高华峰
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 伪结核棒状杆菌 磷脂酶D基因(PLD) 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 82-87
• 页数: 6页
• 分类号: S855.1
• 字数: 4173字
• 语种: 中文

摘要

为了快速检测无临床症状的山羊是否感染山羊伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis),根据GenBank中伪结核棒状杆菌磷脂酶D(phospholipase D,PLD)基因序列,分别设计1对特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件和体系优化,测定特异性、敏感性和稳定性,建立山羊伪结核病TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对54份临床样品进行检测.结果显示:建立的山羊伪结核棒状杆菌方法具有很好的特异性,在20 μL扩增体系中,引物浓度为0.20 μmol/mL,探针浓度为0.45 μmol/mL,退火温度59℃时最佳;最低可检测出4.6× 102个拷贝数的细菌DNA,标准曲线相关系数是0.996.同时,对TaqMan荧光定量PCR和常规PCR进行了比较,前者的敏感性是后者的1 000倍;对54份临床样品进行检测,TaqMan荧光定量PCR检出的阳性率为68.5％ (37/54),常规PCR检出的阳性率为53.7％ (29/54).研究表明:TaqMan荧光定量PCR法检出率较高,有特异、敏感且快速的特点,适用于临床样品的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高华峰		14	73	6.0	8.0
2	李文贵		44	256	9.0	14.0
3	马玉馨		5	9	2.0	2.0
7	邵庆勇		1	2	1.0	1.0