AngⅡ/AT1R 通路下调内皮型一氧化氮合酶磷酸化的机制研究

• 作者: 丁菁 于敏 姜君财 张倩 方沛钰 杨飞 王胜男 陆德琴 骆妍蓓
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ1型受体 蛋白磷酸酶2A 内皮型一氧化氮合酶
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 839-844
• 页数: 6页
• 分类号: R363|R543
• 字数: 4226字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2018.05.011

摘要

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱtype 1 re-ceptor,AT1R)通路通过激活蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)导致大鼠肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)磷酸化水平下调的机制.方法:采用体重160~180 g成年雄性SD大鼠90只,在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉.首先明确AngⅡ下调大鼠肠系膜动脉中eNOS(Ser1177)磷酸化的效应,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组和AngⅡ组,AngⅡ组用浓度为1×10 -7mol/L、1×10 -6mol/L和1×10-5mol/L AngⅡ分别孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h;然后进一步探讨AngⅡ使eNOS(Ser1177)发生磷酸化下调的分子机制,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组、AngⅡ组和坎地沙坦(candesartan,CAN;AT1R特异性抑制剂)+AngⅡ组(用1×10 -5mol/L CAN预处理大鼠肠系膜动脉血管1 h后,再用1×10 -7mol/L AngⅡ继续孵育12 h).采用Western blot法检测肠系膜动脉中eNOS蛋白表达和eNOS(Ser1177)磷酸化水平,以及PP2Ac的蛋白表达、PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白IPP2A2的表达水平,并用PP2A活性检测试剂盒测定大鼠肠系膜动脉PP2A活性变化.结果:(1)与control组比较,AngⅡ孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平均明显降低(P<0.05),且12 h组和24 h组eNOS(Ser1177)磷酸化水平下降均出现明显浓度依赖性,但不同浓度组间eNOS蛋白表达水平差异均无统计学显著性;(2)与control 组比较,1×10 -7mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平降低(P<0.05);CAN预处理可明显上调eNOS(Ser1177)磷酸化水平(P<0.05),且各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学显著性;(3)与con-trol组比较,1×10 -7mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和IPP2A2蛋白表达均降低(P<0.05);CAN预处理可使PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和IPP2A2蛋白表达均增加(P<0.05),但各组间PP2Ac蛋白表达的差异无统计学显著性;(4)与control组比较,1×10 -7mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2A活性增高(P<0.05);CAN预处理可明显抑制AngⅡ对PP2A的激活作用(P<0.05).结论:AngⅡ可通过AT1R通路激活PP2A,从而介导大鼠肠系膜动脉eNOS(Ser1177)磷酸化水平下调,其分子机制可能与PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白IPP2A2表达降低有关.