基于Endo-M N175Q糖链转移反应与丙酮富集糖肽的LC-MS分析糖蛋白N-糖链

• 作者: 张斯然 张春波 金东日 陈奕彤
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 化学
• 关键词: 糖蛋白 N-糖链 酶标记 液相色谱-质谱(LC-MS)
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1311-1315
• 页数: 5页
• 分类号: O657.63|O629.73
• 字数: 3801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2018.11.005

摘要

基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法,建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法.以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽,比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果,最终选择加入样品体积5倍量的丙酮.用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B(RNase B)酶解液中的糖肽,以富集分离得到的糖肽(糖基供体)和PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc(糖基受体)作为酶反应底物,进行Endo-M N175Q的转糖基反应,得到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc-N-糖链标记物.采用YMC C18色谱柱为分析柱,10 mmol/L甲酸铵-乙腈为流动相梯度洗脱,经液相色谱-串联质谱(LC-MS)检测得到5种高甘露糖型糖链.结果表明,丙酮可有效地富集大量肽和少量糖肽混合溶液中的糖肽,Endo-M N175Q可将天然糖肽的糖链转移到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc受体上.将该方法应用于胎球蛋白N-糖链分析,检测到5种复杂型N-糖链.该研究为各种糖蛋白N-糖链检测提供了新的分析方法.