鸭源鸡杆菌flfA基因的克隆表达及抗原性分析

• 作者: 卢彩景 张真真 彭志锋 杨霞 王坤芃 王川庆 王继洋 赵军 陈陆
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭源鸡杆菌 flfA基因 基因克隆 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 900-905
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.05.11

摘要

用PCR方法从鸭源鸡杆菌中国分离株PDS-RZ-1-SLG中扩增flfA基因,并运用生物信息学软件分析鸭源鸡杆菌菌毛蛋白FlfA的二级结构、表面可及性与B细胞优势表位簇;将目的基因插入原核表达载体Pet28a(+),经PCR、酶切及测序鉴定成功构建重组表达质粒pET28a(+)-FlfA,然后转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组质粒表达;SDS-PAGE和Western blot鉴定FlfA的表达及抗原性.结果显示:成功获得与预期大小一致的573 bp的flfA基因;FlfA蛋白结构分析显示其二级结构以无规则卷曲为主,表面存在很多抗原表位;PCR及酶切等鉴定表明重组表达质粒pET28a(+) FlfA构建成功.SDS-PAGE分析显示,经IPTG诱导表达获得相对分子质量约20 000的重组蛋白;Western blot分析结果显示重组菌毛蛋白能被兔抗rFlfA多抗血清和鸡抗鸭源鸡杆菌血清识别,抗原性良好;而且,rFlfA多抗血清与菌毛蛋白具有良好反应性.