大丽轮枝菌原生质体的制备及再生

• 作者: 何芳 沈楠 赵小强 陈志荣 高峰 黄家风
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 大丽轮枝菌 原生质体制备 再生条件 转化
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 166-173
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0160

摘要

为建立大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)原生质体的制备和再生体系,采用单因素分析法分析了大丽轮枝茵摇培时间、裂解酶浓度、酶解时间和温度、渗透压稳定剂的种类和浓度及pH对原生质体释放的影响;从再生培养基、培养基Agar浓度和酶解时间对原生质体的再生条件进行了优化;并对优化条件下获得的原生质体进行了GFP瞬时表达.结果表明,将分生孢子培养18h收集菌丝体,以1.2 mol/L的KC1作为渗透压稳定剂,在pH 6.0的条件下,加入10 mg/mL的裂解酶,30℃酶解4h时,获得的原生质体产量最高,达到3.3×107个/mL;在Agar浓度为0.5％的TB3再生培养基中进行原生质体再生,再生率最高,可达22.45％;GFP瞬时表达结果表明,优化条件下获得的原生质体可用于遗传转化材料.