穿心莲中1个新NADPH-细胞色素P450还原酶的克隆及功能鉴定

• 作者: 刘勇 康莹 张权 林慧馨 王健 王方方 马晓晶 齐梦蝶
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 穿心莲内酯 生物合成途径 细胞色素P450还原酶 原核表达 功能鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 分子生药学
• 页码范围: 309-315
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

穿心莲内酯为传统中药穿心莲中的主要有效成分,具有多种药理活性,广泛运用于临床,但其生物合成途径尚未被解析.细胞色素P450还原酶为CYP450提供电子,在CYP450的催化过程中起重要作用.该研究通过同源比对筛选并克隆了 穿心莲CPR的编码序列,命名为ApCPR4.原核表达ApCPR4蛋白,分离纯化后进行体外酶活鉴定,发现ApCPR4能够以NADPH依赖性方式还原细胞色素c和铁氰化物.为了验证其体内功能,将ApCPR4与CYP76AH1共转化入酵母工程菌,结果表明,ApCPR4在酵母体内能够协助CYP76AH1催化生成铁锈醇.实时定量PCR结果显示,在茉莉酸甲酯(MeJA)处理的叶片中,ApCPR4的表达量逐渐增加.该表达模式与穿心莲内酯受MeJA诱导积累的趋势一致,推测ApCPR4与穿心莲内酯的生物合成相关.