腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性

• 作者: 任静 刘克廷 刘涛 吴铮 朱博 武成聪 王芳 荣树 黄合飞
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 骨髓间充质干细胞 腺病毒 感染复数 细胞毒性 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2018,（17）
• 所属期刊栏目: 骨髓干细胞
• 页码范围: 2650-2655
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6704字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0515

摘要

背景:重组腺病毒对细胞生长、存活存在一定的毒性反应,其最适感染复数的确定相关研究较少.目的:研究重组腺病毒在不同感染复数下其转染效率、细胞毒性及对骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响.方法:携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺毒载体分别以感染复数为0,50,100,150,200,250转染第5代骨髓间充质干细胞.转染24 h后观察细胞形态,锥虫蓝染色计数死亡率;转染48 h后荧光倒置显微镜下计算转染率,qPCR检测EGFP及Runx2基因表达量.MTT法评价不同感染复数转染对细胞活性的影响,确定最佳感染复数.结果与结论:①随感染复数值增加,骨髓间充质干细胞贴壁能力减弱,部分细胞老化、死亡;②以感染复数值为0,50,100,150,200,250转染24 h,其细胞死亡率依次为5.80%,6.67%,7.95%,7.76%,10.35%,11.18%,死亡率与感染复数值成正相关;③当感染复数值为100时即可达到最大转染效率,但当感染复数增大至200时,细胞活性即受到影响;当感染复数达到250时,骨髓间充质干细胞成骨分化潜能受到影响;④通过上述结果可以认为,腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞的感染复数安全范围为50-150,其最适感染复数为100.