慢病毒介导siRNA抑制O型口蹄疫病毒ON株病毒复制

• 作者: 张淑敏 李志勇 甘晓丽 秦晓东 马友记 齐兴财
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: RNA干扰 口蹄疫病毒 BHK21 抑制 慢病毒
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 360-367
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.02.015

摘要

探究RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对口蹄疫病毒复制的抑制作用,本研究选取O型口蹄疫病毒ON株,以ON株口蹄疫病毒3C、3D、VP1蛋白基因作为靶基因.对每一个靶基因设计并合成两对小片段发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)引物,分别命名为VP1-1、VP1-2、3C-1、3C-2、3D-1、3D-2,依据RNAi的原理构建6个shRNA的重组表达质粒,转染BHK21细胞后并接种ON口蹄疫病毒,通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测筛选出能高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒;将能够高效抑制ON口蹄疫病毒复制的重组质粒进行慢病毒的制备并筛选稳定的BHK21细胞系,通过对TCID50的测定和使用实时荧光定量PCR的检测慢病毒干扰载体对ON口蹄疫病毒复制的抑制作用.结果显示,构建的6个shRNA重组表达质粒抑制率均在71.5％～93.2％,其中PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效果最为明显,分别为93.2％和90.8％;慢病毒干扰载体PLKO.1-VP1-2和PLKO.1-3D-1的抑制效率在88.3％～95.49％.对研究结果表明,在细胞的水平上挑选出有效抑制ON口蹄疫病毒复制的基因干扰片段,并成功制备慢病毒干扰载体,为后续抗口蹄疫病毒的转基因羊生产培育奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马友记	甘肃农业大学动物科学技术学院	83	410	11.0	17.0
2	张淑敏	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	28	215	6.0	14.0
3	齐兴财	甘肃农业大学动物科学技术学院	2	2	1.0	1.0
7	秦晓东	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	7	5	2.0	2.0
8	甘晓丽	中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室	1	2	1.0	1.0