猪肌源性前体脂肪细胞的分离培养和成脂诱导分化研究

• 作者: 乐宝玉 张宁芳 成志敏 曹果清 李步高 王媛媛 王鹤洁 秦本源 郭晓红 高鹏飞
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 肌源性前体脂肪细胞 分离培养 肌内脂肪 成脂分化
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 2612-2621
• 页数: 10页
• 分类号: S828.2
• 字数: 7079字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.12.010

摘要

本研究旨在建立猪肌源性前体脂肪细胞的体外培养体系,并探究成脂诱导分化过程中相关基因的表达,为进一步研究调控猪肌内脂肪沉积的分子机制提供试验材料.采集15日龄仔猪的背最长肌组织,使用Ⅱ型胶原酶进行消化,分离获得前体脂肪细胞,进行原代、传代培养以及成脂诱导,观察细胞形态、测定生长曲线、油红O染色鉴定以及检测成脂关键基因PPARγ、FABP4、C/EBPα、C/EBPβ、ZFP423、SREBP1、PRDM16和HSL在诱导分化过程中的表达量.结果表明,分离的猪肌源性前体脂肪细胞在6～7 h,发现少量细胞开始贴壁,贴壁的细胞呈似圆型、小梭型以及其它不规则形状,经传代后细胞形态均一,呈典型的成纤维细胞样,细胞的生长曲线呈S型.添加分化培养基进行诱导后,所有基因在细胞分化的早期均有表达,FABP4、C/EBPa、SR EBP1与PPARγ基因在分化早期表达量极显著升高(P＜0.01),在后期表达量极显著下降(P＜0.01),C/EBPβ、ZFP423和PRMD16基因的表达量在分化过程中未见显著变化,HSL的表达量随着分化进行极显著降低(P＜0.01).在诱导分化12 d左右,油红O染色呈现红色.综上表明,本研究成功建立了猪肌源性前体脂肪细胞的分离与培养体系,进行成脂诱导分化,揭示分化过程中关键基因的表达规律,为进一步研究猪肌内脂肪沉积的分子机制和改善肉质品质奠定基础.