疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达和性质鉴定

• 作者: Dumba Trish 冯凤琴 张婷 张辉 李杨 毛建卫 童志超 蔡海莺 赵敏洁
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶 重组表达 密码子优化 性质鉴定 sn-1,3位置专一性 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 262-271
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2018.06.033

摘要

通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体pPIC9K中.结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/mL,对应的pNPP水解酶活达到312.72U/mL.与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/mL)相比,密码子优化后酶活提高74.29％,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达.比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适pH和温度耐受范围.另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力.