乳酸脱氢酶A促进人脉络膜黑色素瘤细胞的生长

• 作者: 刘丹 刘园园 刘莹 吴亚更 徐小洁 朱晓雨
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 乳酸脱氢酶A 真核表达 人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞 克隆
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 519-522
• 页数: 4页
• 分类号: R773.4
• 字数: 3678字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2018.0121

摘要

目的 成功构建带有Flag标签的人乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的真核表达载体,初步检测LDHA基因对人脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma,CM)MUM-2B细胞生长功能的影响.方法 将军事科学院传代培养的人CM系随机分为实验组和对照组,实验组MUM-2B细胞瞬时转染构建成功带有Flag标签的人LDHA重组质粒(Flag-LDHA),对照组MUM-2B细胞瞬时转染Flag空载质粒;以带有GST标签的Flag-LDHA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增LDHA基因,并将其插入到Flag载体,应用菌液PCR、双酶切和测序方法鉴定重组质粒,鉴定成功后瞬时转染人CM,通过Western blot鉴定其表达;CCK8法检测并绘制生长曲线.结果 PCR技术扩增得到长约1000 bp的LDHA基因的编码区序列,并成功克隆至Flag载体上;与对照组相比,实验组菌液PCR结果为阳性,双酶切鉴定结果为切开两条长约4000 bp的Flag载体和1000 bp的LDHA基因条带,测序鉴定结果为插入的序列与LDHA基因的编码序列完全一致.Western blot检测结果显示,与对照组相比,实验组MUM-2B细胞成功表达LDHA蛋白;CCK8法检测结果显示,实验组MUM-2B细胞较对照组MUM-2B细胞生长快.结论 成功构建了Flag-LDHA真核表达载体,并发现LDHA基因能够促进人CM MUM-2B细胞的生长,为研究LDHA在人CM的发生发展中的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐小洁		51	112	6.0	7.0
2	刘园园		3	2	1.0	1.0
3	刘莹		9	2	1.0	1.0
4	刘丹		9	35	4.0	5.0
5	吴亚更		4	4	1.0	2.0
6	朱晓雨		1	0	0.0	0.0