三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统的建立及评价

• 作者: 夏宁邵 宋硕 李少伟 李智海 杨与柔 柳欣林 王大宁 王致萍 范飞 陈洁 魏双萍 魏旻希
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 疫苗 中和试验 免疫血清 人乳头瘤病毒 三色荧光假病毒
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1039-1044
• 页数: 6页
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2018.10.014

摘要

目的 建立三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统,并评价其在检测HPV九价疫苗免疫血清免疫原性的应用.方法 分别选取红色、绿色和蓝色荧光蛋白的质粒N31-MCHREEY、N31-EGFP和N31-mTagBFP构建HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒,利用双抗夹心法和病毒半数组织培养感染剂量法检测HPV假病毒浓度和感染滴度;利用单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒,检测HPV九价疫苗免疫小鼠血清的中和滴度,以验证三色混合荧光HPV假病毒系统的准确性;采用单色荧光和三色混合荧光HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒系统检测HPV九价疫苗免疫食蟹猴血清的中和滴度,判断其是否可应用于HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测.结果 含有绿色、红色和蓝色荧光质粒的HPV16型假病毒的浓度为5～6μg/ml,HPV6/11/18/31/33/45/52/58的三色混合荧光假病毒浓度为1～3μg/ml.获得了分别含有EGFP、Mcherry和mTagBFP报告基因的9个型别的HPV假病毒,且满足中和检测需要;9个型别单色荧光HPV假病毒的滴度值均在1×104～1×105之间,即它们具有相似的感染滴度.检测HPV九价疫苗免疫的小鼠血清时,单色荧光与三色混合荧光HPV16/33/45假病毒系统所得中和滴度值差异均无统计学意义(P值均>0.05);检测HPV九价疫苗免疫的食蟹猴血清时,单色荧光与三色混合荧光A、B和C组HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58假病毒所得中和滴度值差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论 成功地建立了三色混合荧光HPV假病毒中和检测系统;验证其与单色荧光HPV假病毒系统具有一致性;证实其可应用于检测HPV九价疫苗免疫血清的免疫原性检测中.