微滴数字PCR技术在多拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌筛选中的应用

• 作者: 兰雪 孙旸 常浩 张斯童 李哲 王刚 王春凤 陈光 陈欢
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 微滴数字聚合酶链式反应技术 多拷贝 酿酒酵母 木聚糖酶 rDNA整合法
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 179-184
• 页数: 6页
• 分类号: Q936
• 字数: 4392字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201810028

摘要

为获得高产木聚糖酶酿酒酵母工程菌,利用rDNA整合法构建木聚糖酶酿酒酵母整合表达载体,实现木聚糖酶基因的多拷贝表达,并利用微滴数字聚合酶链式反应技术对转化子拷贝数进行检测,分析木聚糖酶基因拷贝数与酶活力之间的关系.结果表明:利用rDNA整合法获得了10?株不同拷贝数木聚糖酶酿酒酵母工程菌,对其酶活力进行测定,发现当拷贝数小于9时,菌株产酶能力随拷贝数增加而增强,9?拷贝数时菌株产酶能力最强,酶活力为308?U/mL,超过9?拷贝,产酶能力降低.