miRNA-140靶向结合自噬相关基因ULK1的验证

• 作者: 刘文刚 卢岩岩 姚楠 蔡大可 许学猛 赵传喜 陈国材 黄丹娥
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: miRNA-140 ULK1基因 软骨 自噬 凋亡 点突变 组织工程 骨关节炎 质粒 载体 转染 双荧光素酶报告法
• 年，卷（期）: 2018,（24）
• 所属期刊栏目: 组织构建与生物活性因子
• 页码范围: 3831-3836
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 6729字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0799

摘要

背景:自噬可以通过抑制凋亡来缓解膝骨关节炎,miR-140是否可以调节自噬关键基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(uncoordinated 51 like kinase-1,ULK1)基因未见报道.目的:探索miRNA-140对ULK1基因的调控关系.方法:通过miRNA靶基因预测网站预测ULK1基因是否为miRNA-140的靶基因;将ULK1基因的3'端非翻译区全长序列载入海肾荧光素酶基因的下游,通过构建结合位点的突变序列,得到野生型和突变型载体,分别用野生型和突变型海肾荧光素酶载体转染293T细胞,检测每种转染细胞海肾荧光素酶的表达活性;运用miRNA-140 inhibitor对293T细胞进行干预,Western blot检测ULK1蛋白表达水平.结果与结论:与野生型载体组细胞相比,加入miR-140 mimics后荧光素酶的表达活性明显降低(P<0.01);当抑制miRNA-140后,ULK1蛋白的表达明显升高(P<0.01).结果证实,miRNA-140可以与ULK1基因靶向结合从而调控其表达.