人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定

• 作者: 乔佳明 夏宁邵 张振勇 张芝晴 李少伟 顾颖
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 人CD4 免疫
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1201-1205
• 页数: 5页
• 分类号: Q74
• 字数: 3862字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.08.015

摘要

目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析.方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(pAc-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化.运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性.通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成.结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性.小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性.结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础.