猪hnRNPK蛋白与酪氨酸蛋白激酶c-Src的互作分析

• 作者: 张朋朋 徐永杰 徐海霞 李瑞 梁小娟
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 hnRNPK c-Src SH3结构域 酵母双杂交 GST-Pull down
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 243-252
• 页数: 10页
• 分类号: S828.2
• 字数: 7165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.02.003

摘要

旨在探讨猪不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)与含SH3结构域的非受体型酪氨酸激酶(c-Src)之间的互作关系.采用PCR和酶切连接的方法,构建pGBKT7-hnRNPK、pGADT7-c-Src、pGADT7-△SH3、pGADT7-△SH2、pGADT7-△PTKc和pGADT7-SH3酵母双杂交载体,用PEG-LiAc法转化到酵母菌株AH109中,鉴定其自激活活性,并通过酵母双杂交方法从体内验证猪hnRNPK蛋白与c-Src不同缺失体之间的相互作用;采用DNA重组技术构建pET28a-hnRNPK与pGEX-6p1-c-Src、pGEX-6p1-△SH3、pGEX-6p1-△SH2、pGEX-6p1-△PTKc和pGEX-6p1-SH3蛋白表达载体,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化融合蛋白,通过GSTpull-down试验从体外验证猪hnRNPK蛋白与c-Src不同缺失体之间的相互作用.结果表明,成功构建了猪hnRNPK与c-Src不同缺失体的酵母双杂交重组质粒,转化酵母细胞发现各质粒均无自激活活性;在酵母中,与阴性对照相比,共转化pGBKT7-hnRNPK与pGADT7-c-Src或pGADT7-△PTKc或pGADT7-SH3的酵母菌落在SD-Trp-Leu-His-Ade四缺培养基上生长良好,表明在酵母中hnRNPK与c-Src激酶N端的SH3结构域之间存在直接的相互作用;成功构建了猪hnRNPK与c-Src不同缺失体的融合表达质粒,经IPTG诱导表达及纯化获得了可溶性His-hnRNPK、GST-c-Src、GST-△SH3、GST-△SH2、GST-△PTKc和GST-SH3融合蛋白,GST pull-down试验表明,hnRNPK与c-Src N端存在较强的相互作用,与SH2和PTKc结构域相互作用则较弱.本研究揭示了猪hnRNPK蛋白可与c-Src蛋白的N-端的SH3结构域互作,有助于进一步研究它们的调节位点,为深入探讨hnRN-PK与c-Src相互调控关系,进而阐明其生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁小娟	信阳师范学院生命科学学院	10	21	3.0	4.0
5	徐海霞	信阳师范学院生命科学学院	2	1	1.0	1.0
9	李瑞	信阳师范学院生命科学学院	3	7	1.0	2.0
10	张朋朋	信阳师范学院生命科学学院	2	1	1.0	1.0