利用酵母随机展示技术对猪肺炎支原体P97上B细胞表位的筛选和鉴定

• 作者: 刘恒贵 刘玉芬 刘璐 朱可蒙 王宁 辛九庆 郭杰
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 P97黏附蛋白 酵母展示文库 B细胞表位
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1492-1499
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 字数: 4234字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.07.019

摘要

构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位.设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNase I将p97突变基因随机消化成长度100～250 bp的片段,回收产物经3’端加A处理后与用Xcm I酶切的酵母表达载体pCT-Xcm I连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库.利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位.结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×10 6克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽.从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应.P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义.