表达禽网状内皮组织增生病病毒env基因的重组马立克病毒的生物学特性

• 作者: 周忠文 孙淑红 崔治中 林桂芳 王好好 苏帅
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽网状内皮组织增生病病毒 env基因 同源重组 马立克病毒 生物学特性
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1482-1491
• 页数: 10页
• 分类号: S858.315.3
• 字数: 6271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.07.018

摘要

旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV) env基因的重组马立克病毒(Marek's disease virus,MDV),并对其生物学特性进行初步研究.以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+);以其为模板,PCR扩增整个REV env基因真核表达盒并与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体;以其为模板,利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REV env真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用Red E/T同源重组技术插入SC9-1的meq位点,最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶,敲除卡那霉素抗性基因,阳性重组质粒命名为SC9-env BAC.提取SC9-envBAC质粒转染CEF细胞,拯救重组MDV,利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性病毒,命名为SC9-env.分析比较SC9-env在CEF细胞上的复制水平,利用动物试验初步评价SC9-env对SPF鸡的致病性以及SC9-env对SPF鸡感染MDV、REV的免疫保护效果.结果表明,利用同源重组技术构建的重组MDV SC9-env能够稳定表达REV env蛋白,且复制水平与亲本病毒SC9-1相似;该重组毒接种SPF鸡没有明显的致病性,且对rMd5的强毒攻击提供92％的免疫保护,与SC9-1差异不显著;SC9-env显著降低REV感染SPF鸡所引起的体重减轻以及灭活苗抗体下降.构建的表达REV env的重组MDV对感染MDV、REV的SPF鸡具有良好的免疫保护效果.