表达猪白细胞介素2(plL-2)重组乳酸杆菌的构建

• 作者: 刘仲藜 李国江 沙万里 闫满 韦舒婉
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 白细胞介素2 乳酸杆菌 表达
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文

摘要

为了建立表达猪白细胞介素2(pIL-2)的重组乳酸杆菌,用PCR的方法从pMD-18T-pIL-2质粒中扩增pIL-2基因,并送至吉林省库美生物科技有限公司进行测序分析.将测序正确的PCR扩增产物与pSIP409表达载体链接,通过PCR和双酶切方法鉴定重组质粒.将重组载体电转至乳酸杆菌,通过SDS-PAGE电泳和Western Blot的方法鉴定pIL-2蛋白的表达,通过细胞粘附实验检测重组乳酸杆菌对猪肠上皮细胞IPEC-J2细胞的粘附性.结果显示,通过PCR和酶切的方法鉴定pMD-18T-pIL-2质粒中基因大小与pIL-2基因大小相似,吉林省库美生物科技有限公司测序结果与GenBank上pIL-2基因100％吻合.通过SDS-PAGE电泳和Western Blot的方法鉴定,重组乳酸杆菌表达蛋白为pIL-2蛋白.重组乳酸菌可使猪肠道上皮细胞IPEC-J2结构紧密,细胞间粘连蛋白表达量增多.表明重组乳酸杆菌表达的蛋白为猪白细胞介素2(pIL-2)蛋白.