T4 DNA聚合酶在大肠杆菌中高效表达、纯化及部分生物学活性分析

• 作者: 付大伟 孙莹莹 徐伟 陈启蒙
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: T4DNA聚合酶 自诱导 磁珠法 低背景克隆载体 末端平滑化
• 年，卷（期）: 2018,（16）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 214-220
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 6862字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201816031

摘要

T4DNA聚合酶(T4DNApolymerase,T4DP)是基因工程等相关领域中不可缺少的工具酶.为获得大量高纯度并具有生物活性的可溶性T4DP,通过从T4噬菌体基因组中克隆出T4 dp基因,将其克隆到pET-22b(+)质粒中构建重组表达载体pET-22b(+)-T4 dp,经DNA测序检测成功后,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中进行自诱导表达,通过磁珠法高效准确检测T4 DP的可溶性表达情况,并对自诱导的温度和时间进行优化,确定最佳诱导条件为30℃诱导培养10 h,分别利用超声波法、超声波-溶菌酶法及化学裂解法对自诱导表达的重组菌体进行破碎,确定最佳破碎方法为化学裂解法,分别利用Ni SepharoseTM 6 Fast Flow亲和层析柱和MagNi磁珠纯化重组菌体裂解后上清液中的T4 DP,MagNi磁珠能高效地纯化出高纯度的T4 DP,其质量浓度为3073.960μg/mL,成功获得了高纯度高质量浓度的可溶性T4 DP,并使其成功应用于克隆载体的构建,证明其具有较好的末端平滑化活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐伟	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	45	205	8.0	12.0
2	付大伟	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	10	28	3.0	4.0
3	陈启蒙	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	2	5	2.0	2.0
4	孙莹莹	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	4	3	1.0	1.0