猪圆环病毒2型ORF2可溶性表达条件的优化

• 作者: 孙永珍 徐进 李厚伟 谢梅梅 郭晓庆
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 ORF2基因 可溶性表达 优化
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 118-124
• 页数: 7页
• 分类号: S
• 字数: 5638字
• 语种: 中文

摘要

为探索猪圆环病毒2型(PCV2) ORF2基因在大肠杆菌中高效可溶性表达的条件,扩增ORF2基因构建重组表达质粒pET30a-ORF2,转化人大肠杆菌BL21 (DE3)感受态获得重组表达菌;通过改变菌体培养温度和时间、诱导温度和时间、溶解氧量、IPTG及CaCl2浓度,实现目的蛋白高效可溶性表达.结果表明:重组表达质粒pET30a-ORF2经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在大肠杆菌BL21 (DE3)中实现可溶性表达,其最佳表达条件为:在500 mL培养瓶中加入200 mL LB卡那霉素阳性培养基,菌体于37 ℃培养4h后,分别加入IPTG及CaCl2至终浓度为0.6 mmol/L及0.06 mol/L,30 ℃诱导表达4h;重组Cap蛋白的最高表达量占总蛋白的55.9％.说明优化后可实现猪圆环病毒Cap蛋白的可溶性表达,这为进一步研究该蛋白的结构及其生物学特性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李厚伟		2	1	1.0	1.0
3	孙永珍		2	1	1.0	1.0
5	徐进		3	1	1.0	1.0
13	谢梅梅		1	1	1.0	1.0
14	郭晓庆		1	1	1.0	1.0