铁皮石斛蛋白磷酸酶DoPP2C1基因的克隆与表达分析

• 作者: 刘亮亮 张娜 张岗 李欢 白庆庆 郑丽 郭顺星 黑小斌
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 铁皮石斛 蛋白磷酸酶 生物信息学分析 实时定量PCR DoPP2C1基因
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1661-1666
• 页数: 6页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.07.026

摘要

目的 克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛蛋白磷酸酶(protein phosphatase,PP)DoPP2C1基因,并进行生物信息学和表达模式分析.方法 采用实时定量PCR(qRT-PCR)和RACE技术获基因全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 6.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助qRT-PCR检测基因表达模式.结果 分离到DoPP2C1基因(GenBank注册号KJ995533),cDNA全长1 221 bp,编码1条由285个氨基酸组成的多肽,相对分子质量31 080,等电点6.18;推定的DoPP2C1氨基酸序列具有植物PP2C蛋白家族保守的1个PP2C结构域(27-285);该蛋白预测无信号肽或跨膜域,定位在细胞质;DoPP2C1蛋白与多种植物PP2C蛋白一致性较高(56.3％～73.7％),与水稻OsPP2C62、高粱XP_002462907、大麦BAK00362和乌拉尔图小麦EMS47641蛋白等亲缘关系近,聚在PP2C分子进化树的F1分支;DoPP2C1基因具有组织表达特异性,其转录本在石斛根和茎中表达量较高,分别为叶中的7.57倍和1.79倍.结论 获得DoPP2C1基因分子特征,为深入研究该基因在铁皮石斛生长发育、逆境生理以及次级代谢调控中的生物学功能奠定基础.