真核表达质粒pcDNA.3.1(+)-ACE2的构建及其在CHO细胞中的表达

• 作者: 张源淑 王凯 王换换 王鲲 肖航
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 血管紧张素转化酶2 (ACE 2) 真核表达质粒 转染 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 54-58
• 页数: 5页
• 分类号: S827
• 字数: 4275字
• 语种: 中文

摘要

为了构建pcDNA.3.1(+)-血管紧张素转化酶2(ACE2)真核表达质粒并检测在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达,从羊肾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增出ACE2基因,后将其与pcDNA3.1载体进行连接重组,构建pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,经HindⅢ、XhoI限制性内切酶双酶切及DNA序列测序分析等方法验证后,通过Lipofectamine 3000脂质体介导转染至CHO细胞,Western blot法检验ACE2基因在蛋白质水平上的表达.结果显示:RT-PCR扩增出大小约为2 200 bp特异ACE2基因片段,连接获得的pcDNA3.1(+)-ACE2重组体经HindⅢ、Xho I酶切后分别出现约2 200 bp和5 000bp片段,测序分析与GenBank上公布的结果完全一致,表明成功克隆了重组pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,Western blot检测显示该pcDNA3.1(+)-ACE2能在CHO细胞中表达.本研究成功构建了pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,并证实其能在CHO中表达,为后续探究ACE2蛋白活性及其作用的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张源淑	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	99	589	13.0	18.0
2	王凯	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	112	2075	25.0	42.0
3	王换换	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	7	16	2.0	3.0
4	王鲲	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	3	8	2.0	2.0
5	肖航	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	5	18	2.0	4.0