摘要:
目的 研究Slit2及其受体Robo1在人宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞凋亡的影响和潜在机制.方法 分别用实时荧光定量聚合酶链式反应(re-al time PCR)和免疫印迹实验检测Slit2、Robo1、Bcl-2的mRNA和蛋白在20例正常宫颈上皮(NCE)、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)、60例宫颈鳞癌(SCC)组织中的表达情况.在转染试剂Lipofectamine2000 作用下,对HeLa细胞进行转染siRNA(沉默组)、质粒(过表达组)和单纯转染pCMV-HA质粒( pCMV-HA对照)及单纯转染无关siRNA序列的对照组(阴性对照),于特定时间后收集细胞用于后续实验.经Annexin V/PI染色后,用流式细胞术检测Robo1 过表达和Slit2沉默后对细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测细胞凋亡指标PARP-1的剪切形式及Bcl-2的表达.结果 Slit2 mRNA在NCE、CIN、SCC中的相对表达水平分别为 2.48 ±0.36, 1.78 ±0.22, 1.45 ±0.17, Robo1 mRNA 分别为2.69 ±0.31,1.94 ±0.21,1.48 ±0.15,Bcl-2分别为1.61 ±0.21,2.22 ±0.23, 2.85 ±0.28,差异均有统计学意义(均P<0.05).过表达组和pCMV-HA对照组的Robo1相对表达水平分别为3.48 ±0.51,1.00 ±0.14,差异有统计学意义(P<0.05).过表达组早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率分别为(7.81 ±0.80 )%, (14.22 ±1.80 )%和(23.11 ±2.02)%,pCMV-HA组早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率分别为(2.60 ±0.82 )%,(7.33 ±0.81 )%和(9.91 ±1.72 )%,差异有统计学意义( P <0.05 ).沉默组和阴性对照组 Slit2 分别为 1.00 ±0.11, 0.51 ±0.12,差异有统计学意义(P<0.05);阴性对照细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率分别为(4.91 ±1.12 )%,(7.90 ±1.01 )%,(12.80 ±1.70 )%;沉默组分别为(2.82 ±1.01)%,(5.13 ±2.10 )%,(7.92 ±1.90 )%,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 Slit2/Robo1在宫颈癌组织中呈异常低表达,有利于抵抗细胞凋亡,在宫颈癌发生发展中发挥重要作用.