南方红豆杉DXS基因的克隆与功能分析

• 作者: 兰小中 冯国庆 廖志华 李忠玥 杨春贤 王辉 邱飞
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 南方红豆杉 紫杉醇 1-脱氧-D-木糖醇-5-磷酸合成酶 亚细胞定位 功能验证
• 年，卷（期）: 2018,（19）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 4636-4643
• 页数: 8页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.19.026

摘要

目的 从南方红豆杉Taxus chinensis获得紫杉醇生物合成途径关键酶1-脱氧-D-木糖醇-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase,DXS)基因(TcDXS)并进行生物信息学和表达模式分析以及亚细胞定位和功能鉴定.方法 采用RACE技术获得TcDXS全长;利用qRT-PCR分析TcDXS在南方红豆杉不同部位的表达情况;采用亚细胞定位分析TcDXS在细胞中的位置;用颜色功能互补实验检测TcDXS功能.结果 获得的TcDXS由3 031个核苷酸组成,包含了2 229 bp编码区,编码742个氨基酸,其蛋白相对分子质量为79 400,等电点(pI)为7.99;qRT-PCR检测表明TcDXS在南方红豆杉的嫩叶柄中表达量最高,其次是叶和皮,根和茎中的表达量较低;亚细胞定位结果表明,TcDXS定位在叶绿体中;功能互补实验结果表明,在共同转化pAC-BETA和pTrc-TcDXS的大肠杆菌菌落呈现出橘黄色.结论 TcDXS的克隆和功能分析为深入研究紫杉醇生物合成途径和实现其代谢工程奠定了基础.